SF6045 - Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (map) : nouveaux outils pour cerner le risque de contamination des aliments et des environnements

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Chercheuse :

Lucy Mutharia, Ph.D., Département de biologie moléculaire et cellulaire, Université de Guelph

Objectifs :

Élaboration et validation d'un système de dosage pour améliorer la sensibilité et le délai de détection de bactéries MAP actives.

Objectifs spécifiques :

1. Évaluer l'efficacité de la capture immunomagnétique (mAb-IMB) axée sur les anticorps monoclonaux pour l'isolement rapide et spécifique des cellules MAP. Comparer cette méthode à la centrifugation au moyen d'échantillons de viande et de lait dopés au MAP et aux pathogènes fécaux. Déterminer la préparation optimale d'échantillons pour la récupération de MAP par mAb-IMB.
   
2. Déterminer les conditions d'usage de mAb-IMB pour récupérer MAP par la technologie Pathatrix. Pathatrix possède l'avantage du dépistage simultané, par le biais d'IMB, de quatre échantillons séparés de fort volume.
   
3. Nous avons élaboré un protocole pour purifier l'ARNm de MAP, amplifier l'ADNc et identifier les gènes spécifiques de MAP. Nous voulons étudier le potentiel de combinaison de la capture mAB-IMB avec l'essai ARNm pour ne détecter que les MAP vivants (partie reproduction et non reproduction).
   
4. Nous avons identifié les composants d'enrichissement de bouillon à partir de faible inoculum et de MAP soumis à un stress thermique. Au moyen de MAP fécaux soumis à un stress thermique, décontaminés et isolés, doper les bouillons MIGT, BACTEC et HEYA à faible inoculum et comparer le délai de détection des MAP viables.
   
5. Appliquer l'essai au dépistage dans les réservoirs de vrac et de détail du lait en Ontario.

Impact Anticipé :

Évaluation des protocoles pour leur potentiel à améliorer le suivi de la contamination par MAP. Nous voulons identifier les conditions qui permettent d'optimiser la récupération, de minimiser la contamination du dosage et de réduire au minimum le délai de détection d'une bactérie active.

Sommaire des Résultats de Recherche :

L'objectif de cette recherche était d'élaborer de meilleures méthodes ou d'améliorer les méthodes existantes de culture et de détection de Mycobacterium avium, sous-espèce paratuberculosis (ou MAP), l'agent responsable de la paratuberculose chez les vaches, les moutons et les chèvres. MAP est une bactérie à la croissance extrêmement lente qui est également très difficile à cultiver et donc difficile à détecter dans les aliments contaminés et les échantillons de viande ainsi que les échantillons destinés au diagnostic. Les objectifs de la recherche étaient : a) d'élaborer une méthode pour isoler rapidement la bactérie MAP du lait à l'aide de particules magnétisées, b) d'élaborer une méthode basée sur les molécules et pouvant être utilisée pour détecter la bactérie active en moins de temps qu'il n'en faut à l'organisme pour former des colonies détectables sur un support solide et c) d'étudier les systèmes à support liquide et identifier le support qui favorise le plus la croissance de la bactérie MAP. À l'heure actuelle, nous sommes en train d'élaborer une nouvelle particule magnétisée pour récupérer la bactérie dans les échantillons. Nous avons découvert que cette particule magnétisée est meilleure que les réactifs commerciaux. Nos résultats indiquent que la culture des bactéries MAP actives est meilleure si on utilise le système de bouillon de culture paraMGIT ou le système de bouillon TREK; les deux sont des supports commerciaux et se sont révélés, dans nos expériences, supérieurs à d'autres bouillons et au support de croissance pour MAP à base de gélose pour isoler cette bactérie exigeante. Une fois la bactérie isolée de l'échantillon, elle doit être cultivée pendant une courte période dans le bouillon, et les cellules actives doivent être détectées à l'aide des dosages moléculaires, de façon à détecter l'ARN messager bactérien spécifique (molécule uniquement présente dans la cellule vivante). Nous utilisons désormais ces méthodes pour analyser le lait afin de détecter la contamination par la bactérie MAP vivante. Le lait provenant de vaches souffrant de paratuberculose peut contenir la bactérie MAP.

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